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  • Cell line Service

Cell lineServices

  • 서비스 소개

서비스 종류

  • Transient expression test
  • Stable cell line service
  • Cell line authentication service
  • Mycoplasma contamination test
  • Lentivirus Particle service

서비스 개요

    • Mammalian cell에 DNA(vector, DNA fragments 등)를 도입하여 genome에 integration되지 않고 일정기간 발현되어 그 효과를 확인하기 위한 실험법으로, 통상 1-4일 내에 transfected cell를 수거하여 도입한 유전자의 발현 및 그 효과를 분석합니다. 이후 도입된 DNA는 세포내 nuclease 및 세포분열로 인해 점차 사라지게 되는데, 일반적으로 7일까지 지속되는것으로 알려져 있습니다.

서비스 내용

    • - Recombinant protein transient expression test
    • - Reporter (GFP, Luciferase, etc) assay
    • - in vitro transcripts transfection
    • - Protein localization analysis

Transient expression 확인법

    • - Western blot
    • - Real-time PCR
    • - Luciferase assay

Workflow

서비스 개요

    • 코스모진텍에서는 세포주 제작 관련 풍부한 경험과 기술력을 바탕으로, 각종 연구분야에 활용될 수 있는 맞춤형 세포주 제작 서비스 (customized stable cell line construction service)를 제공해 드립니다. 본 서비스에서 제공되는 다양한 옵션을 통해, 연구 목적에 적합한 최적의 맞춤형 세포주를 제작하실 수 있습니다.

서비스 특징

    • - Vector 제작에서부터 세포주 제작까지 Total solution 제공
    • - Mycoplasma test 무료 제공
    • - Cell line authentication service (optional)
    • - 제작된 세포주 6개월 보관 서비스
    • - 상세한 실험서 및 QA 보고서 제공

서비스 내용

  • 서비스 내용
    • Vector construction (optional)
    • Parental cell line sterility test (Mycoplasma contamination test)
    • Parental cell line authentication (optional) (PowerPlex® 18D System)
    • Transient expression test
    • Drug sensitivity test
    • Single clone isolation & validation (PCR or immunoblotting)
    • Clone expansion and preparation of cryo-stock
    Applications
    • Protein overexpression cell line (Not available for production)
    • Reporter cell line (Luciferase, fluorescence protein etc)
    Basic method
    • Vector transfection
    • Generation of stable transfectant by drug screening
    • Clone isolation by physical method & biochemical assay
    결과제공
    • 3 independent clones
    • 각 clone당 2 cryostock (>1x106 cells/vial)
    • Service report
    서비스기간
    • 4~6 months

Workflow

서비스 개요

    • 코스모진텍 세포주검증 (Cell line authentication) 서비스는 게놈상의 STR (short tandem repeat) 마커 profiling을 통하여 다양한 인간유래세포주의 확인, 비교 및 근연관계를 확인할 목적으로 제공되는 서비스입니다. STR profiling을 통한 세포주검증은 고전적인 형태학적 (morphological) 분석이나 핵형 (karyotype) 분석보다도 빠르고 정확한 결과를 보장합니다. 따라서, 본 서비스를 통하여 미리 세포주를 확인하면 실험실에서나 생산시스템에서 세포주가 바뀌거나 섞여서 나올 수 있는 중대한 오류를 미연에 방지할 수 있습니다. 더욱이 최근 연구윤리가 강조됨에 따라 논문투고 시 일부 저널들에서 세포주검증 결과를 요구하는 경우가 점차 확대되고 있는 추세로, 본 서비스는 논문의 신뢰도를 높이는데 큰 도움이 될 것으로 기대합니다.
    • 당사에서는 microsatellite 분석 서비스를 통해 축적된 노하우로 빠르고 정확한 세포주검증 결과를 제공하고 있습니다. 본 서비스에서는 2011년 미국 National DNA Index System (NDIS)에서 법의학 목적의 인간 DNA database 구축에 공식 승인 받은 Promega사의 Powerplex 18D kit 를 기본 사용하고, ANSI 표준 (ASN-0002, Authentication of human cell lines: Standardization of STR profiling)에 따라 서비스를 제공합니다. 결과는 Powerplex 18D kit에 구성된 17종의 상염색체 (autosomal) 마커와 1종의 성감별 (gender) 마커 분석 결과를 ATCC 등의 세포주 profile database 와 비교하거나 또는 연구자로부터 직접 제공받은 reference 세포주와 비교하여 일치 여부를 판단해 드립니다.

서비스 내용

    • - Cell genotyping 및 identification
    • - Cell classification against the ATCC STR database
    • - Easy-to-understand report 제공

활용 분야

    • - Cell line 확인 및 동정
    • - Cell line간의 교차 오염 검증
    • - Cell bank 유지에 필요한 quality control
    • - Cell line 간의 연관성 분석 등
    • - Passage interval간 identity 유지 분석

서비스 특징

    • - 최적화된 분석 플랫폼
      : ABI 3130xL genetic analyzers and Genemapper software
    • - 최적의 분석 Solution setup
      : 관련분야 최고의 분석력과 공신력을 제공하는 PROMEGA사의 Powerplex 18D system
    • - 신속한 분석 및 Reporting
      : 샘플 수령 후 3-5일 (영업일 기준)내 분석 완료 및 결과 보고서 제공
      (Express service 기준)
      : 샘플 수거, gDNA extraction 및 PCR반응 및 결과 분석까지 연구자의 편의를 위한 서비스 제공

Cell line authentication 필수 요구 저널 리스트 (2014년 기준)

    • - BioTechniques
    • - AACR Journals
      • -   Cancer Discovery
        -   Cancer Research
        -   Cancer Prevention Research
        -   Clinical Cancer Research
        -   Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention
        -   Molecular Cancer Therapeutics
        -   Molecular Cancer Research
    • - Cell Biochemistry and Biophysics
    • - International Journal of Cancer
    • - In Vitro Cellular & Developmental Biology – Animal
    • - Nature

Workflow

서비스 개요

    • 세포배양 실험에서 가장 흔한 오염원중의 하나인 mycoplasma는 그 감염여부가 육안으로 쉽게 확인되지 않기 때문에 대부분의 연구자들이 간과하기 쉬운데 그로인한 실험결과는 매우 심각할 수 있습니다. 본 서비스를 통하여 연구자분들께서는 상시 배양세포의 오염여부 및 오염된 mycoplasma 종까지 확인하실 수 있습니다.

Mycoplasma detection method

    • 본 서비스에 사용하는 mycoplasma detection방법은 다양한 mycoplasma 종의 16S rRNA 유전자를 비교분석하여 제작된 universial primer set을 사용한 PCR법입니다. 극소량의 검체 (배양세포 및 배양액)로도 감염여부 판별이 가능하고, 일차적으로 PCR 양성으로 확인된 검체는 DNA sequencing 및 BLAST를 통해 오염 종을 정확히 분석할 수 있습니다.
    • 주 오염원 및 검출 가능한 종 : M. orale, M. hyorhinis, M. fermentans, M. putrefaciens, M. arginini, M yeatsii, A. laidlawii 를 포함한 64종 이상

이럴 때 Mycoplasma 감염을 의심하세요!

    • 감염되는 Mycoplasma 종에 따라 세포주에 미치는 영향은 다양하지만, 일반적으로 다음과 같은 증상을 보일 때 mycoplasma 감염이 의심됩니다.
    • - Abnormality of growth
    • - Decrement of viability
    • - Detachment of adherent cells
    • - Granulation of cells
    • - Reduction of transfection efficiencies
    • - Cell death
    • - Morphological change

Mycoplasma란?

    • Mycoplasma는 parasitic (기생) 또는 saprotrophic (부유성) 특성을 보이는 bacteria로서, 평균 직경 0.1 - 0.5 um의 가장 작은 bacterial cell로 알려져 있으며 광학현미경 하에서는 관찰되기 어렵습니다. Cell wall이 없기 때문에 일반적으로 배지에 첨가하는 beta-lactam계 항생제로 제거가 되질 않습니다. 그렇기 때문에 오염의 방치나 확산이 흔히 발생되며, 과다 증식시 공기중으로도 확산될 수 있습니다. 100여종 이상이 존재하며 이 중 20여종의 mycoplasma가 세포 배양에서 흔히 감염됩니다.
  • 세포유형 감염률
    연속 계대배양 세포주 ~35 %
    신규 분리된 세포주 ~5 %
    Primary cell ~1 %
  • 주요 감염 경로 빈도
    Incoming infected cells 가장 흔한 원인
    실험자에 의한 감염 흔한 원인
    세포배양액 (serum등) 특정 경우
  • 주요 감염원 감염률
    M. orale 20 ~ 40%
    M. hyorhinis 10 ~ 40%
    M. arginini 20 ~ 30%
    M. fermentans 10 ~ 20%
    M. hominis 10 ~ 20%

Workflow

  • * 샘플은 3일 이상 배양한 배양액 (1 ml) 또는 cell pellet으로 의뢰하시면 됩니다.
  • * 2-3 영업일내로 결과가 제공됩니다.

서비스 개요

    • Lentivirus는 Retrovirus 속에 포함되는 RNA virus의 일종으로 효율적인 유전자 전달을 위해 사용되는 방법 중 하나입니다. 주로 형질주입(Transfection)이 어려운 세포에서 Lentivirus를 이용하여 형질도입을 진행하거나 Lentivirus의 숙주 유전자(Host cell gDNA)에 통합되는 특징을 이용하여 안정적이게 발현되게 하는 Stable cell line 제작에 주로 사용됩니다.
      코스모진텍에서는 Genecopoeia사의 3세대 Lentivirus 패키징 시스템을 이용하여 Titer, Quality, Safety 등을 일관성 있게 제조하여 Client의 요구 조건을 만족시킬 수 있는 서비스와 Custom vector를 이용한 Custom Lentivirus 제작 서비스를 제공하고 있습니다.

서비스 장점

    • - 국내 생산을 통한 짧은 제작 기간 및 배송
    • - 안정적인 Titer Lentivirus 제공 ≥ 1 x 107 TU/ml 200 ul를 제공하여 안정적인 Infection 진행을 도와드립니다.
    • - VSV-G pseudotype된 3세대 Lentivirus를 사용하여 더욱 안전한 Lentivirus를 제공합니다.

Pre-made Lentivirus Particle

배송 및 보관

    • - Lentivirus는 PEG Concentration solution 진행하여 PBS에 녹인 후 얼려져 Dry ice와 함께 배송합니다.
    • - 수령 후 장기 보관은 -80℃ 이하의 depp freezer에서 보관하셔야 하며 일주일 이내 사용시 -20 ℃ 보관을 권장합니다.
    • - Lentivirus의 유통기간은 -80℃ 이하에서 보관 시 약 1년이며 반복적인 Freezing과 Thawing은 피하시는 것을 권장합니다.

Custom Lentivirus Particle

    • - 원하는 Lentivirus의 Template Lentivirus vector를 보내시는 경우 제작이 가능하며 특정 Assertion Number (NM_number), Tag, selection marker 등은 상담을 통해 제작 진행이 가능합니다.
    • - 자세한 상담은 상담문의 게시판 또는 연구개발팀 (Tel. 02-465-6277)로 문의주세요.
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