코스모진텍
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  • Cell line Service

Cell lineServices

  • 서비스 소개

서비스 종류

  • Transient expression test
  • Stable cell line service
  • Cell line authentication service
  • Mycoplasma contamination test

서비스 개요

    • Mammalian cell에 DNA (vector, DNA fragments 등) 또는 RNA (siRNA, miRNA, mRNA 등)를 도입하여 genome에 integration되지 않고 일정기간 발현되어 그 효과를 확인하기 위한 실험법으로, 통상 1-4일 내에 transfected cell를 수거하여 도입한 유전자의 발현 및 그 효과를 분석합니다. 이후 도입된 DNA 및 RNA는 세포내 nuclease 및 세포분열로 인해 점차 사라지게 되는데, 일반적으로 7일까지 지속되는것으로 알려져 있습니다.

서비스 내용

    • - Recombinant protein transient expression test
    • - Reporter (GFP, Luciferase, etc) assay
    • - shRNA expression vector transient expression test
    • - siRNA or miRNA transient transfection
    • - in vitro transcripts transfection
    • - Protein localization analysis

Transient expression 확인법

    • - Western blot
    • - Real-time PCR
    • - Luciferase assay
    • - Immunocytochemistry (ICC)

Workflow

서비스 개요

    • 코스모진텍에서는 세포주 제작 관련 풍부한 경험과 기술력을 바탕으로, 각종 연구분야에 활용될 수 있는 맞춤형 세포주 제작 서비스 (customized stable cell line construction service)를 제공해 드립니다. 본 서비스에서 제공되는 다양한 옵션을 통해, 연구 목적에 적합한 최적의 맞춤형 세포주를 제작하실 수 있습니다.

서비스 특징

    • - Vector 제작에서부터 세포주 제작까지 Total solution 제공
    • - Mycoplasma test 무료 제공
    • - Cell line authentication service (optional)
    • - 제작된 세포주 6개월 보관 서비스
    • - 상세한 실험서 및 QA 보고서 제공

서비스 내용

  • 서비스 내용
    • Vector construction (optional)
    • Parental cell line sterility test (Mycoplasma contamination test)
    • Parental cell line authentication (optional) (PowerPlex® 18D System)
    • Transient expression test
    • Drug sensitivity test
    • Single clone isolation & validation (PCR or immunoblotting)
    • Clone expansion and preparation of cryo-stock
    Applications
    • Protein overexpression cell line (Not available for production)
    • shRNA-based knock-down cell line
    • Reporter cell line (Luciferase, fluorescence protein etc)
    Basic method
    • Vector transfection
    • Generation of stable transfectant by drug screening
    • Clone isolation by physical method & biochemical assay
    결과제공
    • 3 independent clones
    • 각 clone당 2 cryostock (>1x106 cells/vial)
    • Service report
    서비스기간
    • 12-20 weeks

Workflow

서비스 개요

    • 코스모진텍 세포주검증 (Cell line authentication) 서비스는 게놈상의 STR (short tandem repeat) 마커 profiling을 통하여 다양한 인간유래세포주의 확인, 비교 및 근연관계를 확인할 목적으로 제공되는 서비스입니다. STR profiling을 통한 세포주검증은 고전적인 형태학적 (morphological) 분석이나 핵형 (karyotype) 분석보다도 빠르고 정확한 결과를 보장합니다. 따라서, 본 서비스를 통하여 미리 세포주를 확인하면 실험실에서나 생산시스템에서 세포주가 바뀌거나 섞여서 나올 수 있는 중대한 오류를 미연에 방지할 수 있습니다. 더욱이 최근 연구윤리가 강조됨에 따라 논문투고 시 일부 저널들에서 세포주검증 결과를 요구하는 경우가 점차 확대되고 있는 추세로, 본 서비스는 논문의 신뢰도를 높이는데 큰 도움이 될 것으로 기대합니다.
    • 당사에서는 microsatellite 분석 서비스를 통해 축적된 노하우로 빠르고 정확한 세포주검증 결과를 제공하고 있습니다. 본 서비스에서는 2011년 미국 National DNA Index System (NDIS)에서 법의학 목적의 인간 DNA database 구축에 공식 승인 받은 Promega사의 Powerplex 18D kit 를 기본 사용하고, ANSI 표준 (ASN-0002, Authentication of human cell lines: Standardization of STR profiling)에 따라 서비스를 제공합니다. 결과는 Powerplex 18D kit에 구성된 17종의 상염색체 (autosomal) 마커와 1종의 성감별 (gender) 마커 분석 결과를 ATCC 등의 세포주 profile database 와 비교하거나 또는 연구자로부터 직접 제공받은 reference 세포주와 비교하여 일치 여부를 판단해 드립니다.

서비스 내용

    • - Cell genotyping 및 identification
    • - Cell classification against the ATCC STR database
    • - Easy-to-understand report 제공

활용 분야

    • - Cell line 확인 및 동정
    • - Cell line간의 교차 오염 검증
    • - Cell bank 유지에 필요한 quality control
    • - Cell line 간의 연관성 분석 등
    • - Passage interval간 identity 유지 분석

서비스 특징

    • - 최적화된 분석 플랫폼
      : ABI 3130xL genetic analyzers and Genemapper software
    • - 최적의 분석 Solution setup
      : 관련분야 최고의 분석력과 공신력을 제공하는 PROMEGA사의 Powerplex 18D system
    • - 신속한 분석 및 Reporting
      : 샘플 수령 후 3-5일 (영업일 기준)내 분석 완료 및 결과 보고서 제공
      (Express service 기준)
      : 샘플 수거, gDNA extraction 및 PCR반응 및 결과 분석까지 연구자의 편의를 위한 서비스 제공

Cell line authentication 필수 요구 저널 리스트 (2014년 기준)

    • - BioTechniques
    • - AACR Journals
      • -   Cancer Discovery
        -   Cancer Research
        -   Cancer Prevention Research
        -   Clinical Cancer Research
        -   Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention
        -   Molecular Cancer Therapeutics
        -   Molecular Cancer Research
    • - Cell Biochemistry and Biophysics
    • - International Journal of Cancer
    • - In Vitro Cellular & Developmental Biology – Animal
    • - Nature

Workflow

서비스 개요

    • 세포배양 실험에서 가장 흔한 오염원중의 하나인 mycoplasma는 그 감염여부가 육안으로 쉽게 확인되지 않기 때문에 대부분의 연구자들이 간과하기 쉬운데 그로인한 실험결과는 매우 심각할 수 있습니다. 본 서비스를 통하여 연구자분들께서는 상시 배양세포의 오염여부 및 오염된 mycoplasma 종까지 확인하실 수 있습니다.

Mycoplasma detection method

    • 본 서비스에 사용하는 mycoplasma detection방법은 다양한 mycoplasma 종의 16S rRNA 유전자를 비교분석하여 제작된 universial primer set을 사용한 PCR법입니다. 극소량의 검체 (배양세포 및 배양액)로도 감염여부 판별이 가능하고, 일차적으로 PCR 양성으로 확인된 검체는 DNA sequencing 및 BLAST를 통해 오염 종을 정확히 분석할 수 있습니다.
    • 주 오염원 및 검출 가능한 종 : M. orale, M. hyorhinis, M. fermentans, M. putrefaciens, M. arginini, M yeatsii, A. laidlawii 를 포함한 64종 이상

이럴 때 Mycoplasma 감염을 의심하세요!

    • 감염되는 Mycoplasma 종에 따라 세포주에 미치는 영향은 다양하지만, 일반적으로 다음과 같은 증상을 보일 때 mycoplasma 감염이 의심됩니다.
    • - Abnormality of growth
    • - Decrement of viability
    • - Detachment of adherent cells
    • - Granulation of cells
    • - Reduction of transfection efficiencies
    • - Cell death
    • - Morphological change

Mycoplasma란?

    • Mycoplasma는 parasitic (기생) 또는 saprotrophic (부유성) 특성을 보이는 bacteria로서, 평균 직경 0.1 - 0.5 um의 가장 작은 bacterial cell로 알려져 있으며 광학현미경 하에서는 관찰되기 어렵습니다. Cell wall이 없기 때문에 일반적으로 배지에 첨가하는 beta-lactam계 항생제로 제거가 되질 않습니다. 그렇기 때문에 오염의 방치나 확산이 흔히 발생되며, 과다 증식시 공기중으로도 확산될 수 있습니다. 100여종 이상이 존재하며 이 중 20여종의 mycoplasma가 세포 배양에서 흔히 감염됩니다.
  • 세포유형 감염률
    연속 계대배양 세포주 ~35 %
    신규 분리된 세포주 ~5 %
    Primary cell ~1 %
  • 주요 감염 경로 빈도
    Incoming infected cells 가장 흔한 원인
    실험자에 의한 감염 흔한 원인
    세포배양액 (serum등) 특정 경우
  • 주요 감염원 감염률
    M. orale 20 ~ 40%
    M. hyorhinis 10 ~ 40%
    M. arginini 20 ~ 30%
    M. fermentans 10 ~ 20%
    M. hominis 10 ~ 20%

Workflow

  • * 샘플은 3일 이상 배양한 배양액 (1 ml) 또는 cell pellet으로 의뢰하시면 됩니다.
  • * 1-2 영업일내로 결과가 제공됩니다.
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